Trabajo Fin de Grado defendido por Silvia Díaz Franchy

25 de julio de 2019

Trypanosoma cruzi es el parásito protozoo causante de la enfermedad de Chagas, que afecta entre 6 y 8 millones de personas. Es una enfermedad transmitida principalmente por insectos de la familia Reduviidae, aunque también se puede transmitir por vía oral, mediante transfusiones o vía congénita. Se trata de una enfermedad infradiagnosticada en Europa, siendo España el país europeo con mayor número de personas afectadas por T. cruzi. En los países endémicos los animales salvajes suponen uno de los principales reservorios, haciendo el manejo y obtención de muestras difícil. Por tanto, se ha constatado la necesidad de buscar nuevas matrices diagnósticas, fáciles de obtener, no invasivas y eficaces.
El objetivo de este estudio es determinar la validez del pelo como muestra alternativa a la sangre para el diagnóstico de T. cruzi mediante PCR, utilizando pelo de ratones infectados experimentalmente. Entre las razones que motivan este trabajo se encuentra la mejora del bienestar animal en los animalarios y la posibilidad de realizar un mejor control en los animales silvestres, ya que el pelo es una muestra no invasiva, resistente, que no necesita refrigeración y de fácil transporte.
Para este estudio se utilizaron ratones infectados intraperitonealmente con T. cruzi y se analizó un total de 54 muestras de pelo. En primer lugar se realizó la extracción de ADN con el kit comercial Blood and Tissue (Qiagen, Alemania) en el laboratorio de nivel de bioseguridad 3 de VISAVET. Posteriormente se llevó a cabo una PCR tiempo real para la que se utilizó el kit comercial Quantifast Pathogen + IC (Qiagen, Alemania). También se dispuso de resultados de PCR de muestras de sangre de los mismos ratones, pudiendo llevar a cabo una comparación entre ambas matrices. Por último se realizó el análisis estadístico de los resultados mediante el programa estadístico WINPEPI (PEPI for Windows).
Del total de 54 muestras de pelo analizadas, 24 resultaron positivas a T. cruzi por PCR, obteniendo por tanto un 44,44% de positivos, con una media de amplificación de 33,43 Cts. En cuanto a los resultados en sangre, se dispuso de 18 muestras que amplificaron a una media de 19,86 Cts. Los resultados fueron coincidentes en 17 de estas muestras.
Por tanto, este trabajo muestra la posibilidad de detectar ADN de T. cruzi por PCR en pelo de ratón. Sin embargo, las muestras amplifican a Cts mayores que en sangre, siendo por tanto una muestra con menor carga parasitaria. Son necesarios estudios futuros con un mayor número de muestras para corroborar los resultados de este estudio