PhD Thesis defense by Cristina Ballesteros Tercero at the Faculty of Veterinary Medicine of the Complutense University of Madrid

July 5^th, 2004

Este estudio se ha centrado en describir las especies de enterococos presentes en el intestino de las especies analizadas y las posibles relaciones entre éstas y las características del ave (área de alimentación, tipo de dieta, carácter migratorio o sendentario, ..), así como determinar su perfil de resistencia frente a nueve antimicrobianos: penicilina, amoxicilina, trimetoprim, gentamicina, eritromicina, ciprofloxacina, bacitracina, virginiamicina y con especial interés frente a vancomicina. Se han analizado 511 individuos pertenecientes a 41 especies de aves distintas, aislándose diez especies diferentes de enterococos. E.faecalis fue aislado en el 77,1% de los individuos, E.faecium en el 13,3%, E.hirae en el 6,65, E.avium en el 6%, y el resto de los aislados (E.casseliflavus, E.durans, E.gallinarum, E.moraviensis, E.mundtii y E.raffinosus) se presentaron de forma esporádica. La composición y diversidad de especies de entrococos en las heces de aves silvestres parece depender sobre todo de la alimentación y condiciones del ambiente en el que se desarrolla el ciclo vital del hospedador. Así, los animales en estado cautivo o de hábitats periurbanos o que presentan una dieta oportunista son los que presentan una mayor diversidad de enterococcos. Por el contrario, cuando existe una especialización en un alimento y/o habitan en ambientes con menor influencia de la actividad humana se encuentra una menor diversidad de enterococos. Para determinar las posibles relaciones genéticas entre los aislados se empleó la técnica de PFGE en aislados de las especies E.faecalls y E.faecium. En ambas especies se encontró una gran variedad genética. Los aislados de E.faecalis formaban genogrupos según la especie de hospedador de origen. Asimismo, en aquellas especies coloniales, que en el estudio corresponden a las especies Pingüino de Magallanes (Spheniscus magellanicus) y Cernícalo Primilla (Falco naumanní), donde se producen una elevada densidad de animales en época de cría, se encontró la existencia de un patrón de restricción mayoritario, que se presentaba en un tercio de los aislados obtenidos, lo que prueba la existencia de una asociación entre ciertos enterococos y la especie de hospedador. La presencia de resistencias a los antimicrobianos en muchas especies bacterianas en un hecho constatado a nivel mundial. Los enterococos constituyen un género de bacterias destacado en este sentido por su capacidad para adquirir resitencias a diversas sustancias, entre las que se encuentran tetraciclinas, eritromicina, cloranfenicol, trimetoprim, aminoglicósidos, penicilinas y glicopéptidos. Sin duda, es la resistencia a glicopéptidos, concretamente a la vancomicina, uno de los fenómenos que ha desperatado mayor preocupación en Medicina humana por sus implicaciones terapeúticas. El porcentaje de aisaldos resistentes a los antimicrobianos mediante la prueba de difusión en agar fue: 5,8% frente a penicilina, 0,6 frente a amoxicilina, 2,1% a vancomicina, 20,2% a bacitracina, 66,8% frente a gentamicina, 29% frente a eritromicina, 74,4% frente a virginiamicina, 13,5% frente a ciprofloxacina, y 5,2% frente a trimetoprim. Por especie de enterococo, los porcentajes más elevados de resistencia se presentaron en E.faecalis y sobre todo, en E.faecium. Los niveles de resistencia obtenidos son similares a los de otros orígenes (animales de abasto y productos derivados de éstos) lo que cuestiona eluso de esta bacteria como indicador de antibiorresistencias de forma general. Los trece aislados resistentes a vancomicina tanto por difusión en agar como por dilución (onde de la especie E.faecium y dos de la especie E.faecalis) presentaban el genotipo vanA, lo que se determinó mediante la realización de una PCR específica. Los aislados multirresistentes, entre los que estaban los resistentes a vancomincina, procedían de hospedadores mantenidos en cautividad o ligados a ambientes sinántropicos con una dieta "oportunista", lo que sugiere una relación entre la proximidad al hombre y la presentación de antibiorresistencias