Oral communication in XXVI Edición del Simposio Nacional AVEDILA

November 20^th, 2023

Alonso-Moreno P., Ortega J., Velasco-Reinaldos C., Lopez A., Izquierdo-García JL. and Bezos J.

El diagnóstico ante-mortem de la tuberculosis (TB) en animales, especialmente en rumiantes domésticos (ganado bovino y caprino), sigue siendo un desafío significativo. Esta dificultad, junto con otros factores, influye en la complejidad de controlar y erradicar esta grave enfermedad en numerosos países. El ganado bovino y caprino se considera el principal reservorio doméstico de la tuberculosis animal y la principal fuente de casos de tuberculosis TB humana de origen animal (zoonosis). Por tanto, se continúa investigando intensamente para mejorar las técnicas de diagnóstico existentes y desarrollar nuevas herramientas que contribuyan a la erradicación de esta enfermedad. En esta línea, previamente validamos con éxito un enfoque metabolómico que emplea la resonancia magnética nuclear (RMN) para el diagnóstico de la TB en ganado bovino. El presente estudio tuvo como objetivo establecer y evaluar el análisis metabolómico mediante RMN para el diagnóstico de la tuberculosis caprina.
Para ello, recolectamos muestras de suero de 51 cabras de una granja que mantenía dos rebaños independientes, uno infectado de TB, del cual se recogieron 26 muestras de animales positivos, y otro libre (control), del que se tomaron 25 muestras de animales negativos. Las muestras positivas y negativas se seleccionaron con base a análisis previos mediante la prueba de la intradermotuberculina simple (IDTBs) y la prueba de detección de interferón-gamma. Las muestras se sometieron a un proceso de filtración por ultracentrifugación para eliminar las señales de macromoléculas, como lípidos y proteínas, y posteriormente se analizaron mediante un espectrómetro de RMN Bruker AVIII de 700 MHz. Las señales espectrales se analizaron en primer lugar mediante un análisis multivariante no supervisado (Análisis de Componentes Principales, PCA) y, a continuación, un análisis multivariante supervisado (Análisis de Mínimos Cuadrados Parciales, PLS), utilizando la aplicación web Metaboanalyst para identificar las diferencias entre los grupos.
El análisis no supervisado PCA reveló una discriminación clara entre el grupo con TB y el grupo de control (ver Figura 1). El análisis supervisado corroboró esta separación con una tasa de acierto del 100% en la validación cruzada (R2=0.95; Q2=0.93). Asimismo, logramos identificar 15 metabolitos endógenos que mostraron diferencias significativas entre los animales con TB y los animales de control. Estos resultados, sumados a los obtenidos previamente en ganado bovino, respaldan nuestra aproximación metabolómica como una herramienta de gran utilidad para el diagnóstico ante-mortem de esta enfermedad en diversas especies animales.
Figura 1: Analisis de Componentes Principales (PCA) de espectros de plasma sanguineo medidos mediante Espectroscopía de RMN. La gráfica de “scores” claramente separa el grupo TB (verde, positivo) del grupo control (rojo, negativo). El PC1 y el PC2 son capaces de explicar el 60% de la varianza total entre muestras

	Instituto Pluridisciplinar. Universidad Complutense (UCM).
	Servicio de Micobacterias (MYC). Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET). Universidad Complutense (UCM).
	Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad Complutense (UCM).
	Facultad de Farmacia. Universidad Complutense (UCM).
	Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Respiratorias (CIBERES). Instituto de Salud Carlos III (ISCIII).