Poster presented in XXVII Simposio Nacional AVEDILA

November 14^th, 2024

Perez-Sancho M., Herranz-Benito C., Garcia-Seco T., Perello-Jiménez A., Diez-Guerrier A., Martinez-Murcia A., Dominguez M., Moreno I., Gortazar C. and Dominguez L.

En la última década, el número de estudios sobre muestreos no invasivos aplicados en sanidad animal se ha visto incrementado ya que permiten la monitorización de agentes infecciosos facilitando una cobertura espaciotemporal más amplia velando por el bienestar animal. Sin embargo, esta aproximación presenta ciertas limitaciones, ya que la cantidad y la calidad del ADN obtenido puede ser inferior a la de los muestreos tradicionales, pudiendo ser más frecuente la presencia de inhibidores de técnicas moleculares.
En el contexto de optimización de protocolos que permitan recuperar eficientemente material genético para mitigar las limitaciones asociadas a este tipo de muestras, en el presente estudio evaluamos distintos tratamientos de reconstitución de esponjas conservadas en un líquido surfactante (previamente empleadas con éxito para la detección de diversos patógenos como SARS-CoV-2 o Brucella suis) como paso previo a la extracción del material genético del líquido recogido a partir de las mismas.
Para ello se tomaron 25 esponjas (con líquido) ambientales previamente seleccionadas de puntos de muestreo de situación epidemiológica conocida y se evaluaron tres protocolos de reconstitución: (A) esponja reconstituida con 10 mL de líquido surfactante, (B) esponja no reconstituida y (C) la misma esponja de la opción B reconstituida con 10 mL de solución salina al 0,85%. Cada muestra de material genético extraído se sometió a la detección mediante PCR en tiempo real de tres dianas genéticas: IS6110 (complejo Mycobacterium tuberculosis), IS900 (M. avium subespecie paratuberculosis) e IS1111 (Coxiella burnetii).
Los resultados no mostraron diferencias estadísticamente significativas en el número de positivos entre los tres métodos para las 25 muestras seleccionadas; para IS6110: opción A 10 positivos, opción B 13 positivos, opción C 7 positivos. Para IS900: opción A 24 positivos,opción B 21 positivos y opción C 25 positivos. Para IS1111, opción A 17 positivos, opción B 19 positivos y opción C 20 positivos.
La adición de líquido surfactante para homogenizar y extraer muestras sólidas ya ha sido previamente descrita, pudiendo ser la elección del diluyente importante al afectar a la detección de microorganismos. Sin embargo, hay poca literatura comparando diferentes líquidos de reconstitución para muestras ambientales sólidas como esponjas. En nuestro estudio, la ausencia de diferencias estadísticamente significativas sugiere que, aunque la optimización de otras variables asociadas al procesamiento y extracción de ADN puedan mejorar la sensibilidad diagnóstica, algunas variables (como la elección del diluyente) asociadas con el método de manejo de muestras previo a la extracción de material genético podría tener un impacto menor, permitiendo una mayor flexibilidad en el manejo y procesamiento de este tipo de muestras. Sin embargo, la elección del diluyente para la reconstitución de muestras ambientales sólidas, como las esponjas, puede ser crítico respecto a otros aspectos como, por ejemplo, la capacidad de
inactivación de microorganismos lo que hace que sea una variable a tener en cuenta en próximas investigaciones en distintos contextos epidemiológicos

	Servicio de Identificación y Caracterización Microbiana (ICM). Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET). Universidad Complutense (UCM).
	Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad Complutense (UCM).
	Sanidad y Biotecnología (SaBio). Instituto de Investigación en Recursos Cinegéticos (IREC). Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Universidad de Castilla La Mancha (UCLM). Gobierno de Castilla-La Mancha (JCCM).
	MAEVA SERVET, S.L..
	Departamento de Microbiología. Universidad Miguel Hernández (UMH).
	Servicio de Inmunología. Centro Nacional de Microbiología (CNM). Instituto de Salud Carlos III (ISCIII).