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Caracterización de la cinética de interacción de L. amazonensis con leucocitos de la sangre de C57BL/6 y C57BL/6 C3-/-: Una aproximación metodológica

Poster presentado en Jornadas Vigilancia Sanitaria 2023: presente y futuro para 2030

6 de julio de 2023

Sanchez D., Sanchez E., Collar D., Crespo S., Martin AB., Zamora L., Hermoso de Mendoza J., Risalde MA., Moreno I. y Dominguez M.

En estudios previos en nuestro laboratorio comprobamos que en una infección “ex vivo” de sangre humana los promastigotes son opsonizados rápidamente por componentes del sistema del complemento (SC), a los 5 minutos de infección, los neutrófilos y los monocitos unen e interiorizan parásitos. En la transmisión de Leishmania, el contexto y el repertorio de células que intervienen en los primeros estadios definen el tipo e intensidad de la respuesta inmunitaria innata del hospedador. A su vez, el tipo de respuesta inmune innata que tenga lugar durante la primoinfección es de vital importancia en el control del inóculo infectivo y diseminación del mismo.
Además, la respuesta inmune innata desarrollada condiciona el tipo e intensidad de la respuesta inmune adaptativa. La cooperación entre ambas es decisiva para eliminar la enfermedad.
El modelo de infección de ratones por Leishmania ha sido muy útil para estudiar tanto el mecanismo de infección como la respuesta inmunitaria en la Leishmaniasis. En nuestro caso el un objetivo esencial era conocer el efecto que el SC, el componente humoral más importante de la respuesta inmune innata, ejerce sobre el curso de la infección por Leishmania a través de la regulación que este sistema ejerce sobre la actividad fagocítica de neutrófilos y monocitos. La existencia de cepas deficientes en el componente C3 como es la C57BL/6 C3-/- nos permitió el abordaje de este objetivo. Diseñamos un modelo de infección ex vivo por L.amazonensis en sangre de ratones deficientes C57BL/6 C3-/- y competentes C57BL/6 y comprobamos que durante la primoinfección este componente era esencial para la unión e internalización de los
promastigotes de Leishmania en las células fagocíticas de la sangre (neutrófilos y monocitos).
Para poder realizar el seguimiento cinético de unión e internalización de los promastigotes a los leucocitos utilizamos parásitos marcados con el AcM-fluoresceinado anti L.amazonesis (SIM 6) desarrollado en nuestro laboratorio. El empleo de un anticuerpo fluoresceinado y unido a los promastigotes, posibilitó el apantallamiento por azul tripano de solo la fluorescencia asociada a los promastigotes unidos a la superficie celular y así discernir el porcentaje de células que unen o unen-interiorizan parásitos. No obstante, comprobamos que en estas condiciones los porcentajes de interiorización alcanzados eran superiores a los obtenidos al emplear el fragmento F(ab)2 del AcM-fluoresceinado. El aumento, al emplear la molécula completa del AcMfluoresceinado,
lo atribuimos a que las leishmanias opsonizadas por el AcM pudieran estar utilizando, además de los mecanismos de opsonofagocitosis mediada por complemento, los de
fagocitosis mediada por anticuerpos a través de receptores Fc. Desarrollar un método que eliminara este efecto y poder valorar la acción del sistema del complemento en la infección ex vivo por promastigotes de Leishmania a células de la sangre, era decisivo en el abordaje del objetivo del presente trabajo. Objetivo que fue alcanzado al utilizar el fragmento F(ab)2 procedente de la digestión del AcM SIM 6 fluoresceínado y el emplear sangre de ratones competentes y deficientes para el componente C3 del SC.
Hemos confirmado que para la unión e internalización Leishmania a neutrófilos y monocitos de la sangre de ratón es esencial la activación del SC por los promastigotes. Dicha activación conlleva la opsonización del parasito, principalmente por C3, lo que facilita el acceso del parásito a dichas poblaciones celulares. Estos mismos experimentos llevados a cabo con sangre humana nos permiten afirmar que tanto en humanos como en ratón, durante la primoinfección, el SC juega un papel crucial en el curso de la infección





Participantes:

Instituto de Salud Carlos IIIServicio de Inmunología. Centro Nacional de Microbiología (CNM). Instituto de Salud Carlos III (ISCIII).

Universidad ComplutenseServicio de Micobacterias (MYC). Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET). Universidad Complutense (UCM).

Universidad de CórdobaDepartamento de Anatomía y Anatomía Patológica Comparadas. Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad de Córdoba (UCO).


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Jornadas Vigilancia Sanitaria 2023: presente y futuro para 2030


Jornadas Vigilancia Sanitaria 2023: presente y futuro para 2030
6-7 julio de 2023
Madrid
España

TÍTULO: Caracterización de la cinética de interacción de L. amazonensis con leucocitos de la sangre de C57BL/6 y C57BL/6 C3-/-: Una aproximación metodológica


TIPO: Comunicación en póster


AUTORES: Sanchez D., Sanchez E., Collar D., Crespo S., Martin AB., Zamora L., Hermoso de Mendoza J., Risalde MA., Moreno I. y Dominguez M.


6th
Leydis Zamora Morales
7th
Javier Cristóbal Hermoso de Mendoza Aranda
Last
Mercedes Domínguez Rodríguez

FECHA: 6 de julio de 2023



CITA ESTA COMUNICACIÓN:

Sanchez D., Sanchez E., Collar D., Crespo S., Martin AB., Zamora L., Hermoso de Mendoza J., Risalde MA., Moreno I. y Dominguez M. Caracterización de la cinética de interacción de L. amazonensis con leucocitos de la sangre de C57BL/6 y C57BL/6 C3-/-: Una aproximación metodológica. Jornadas Vigilancia Sanitaria 2023: presente y futuro para 2030, VISAVET Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria. Universidad Complutense, Madrid, España, 6 de julio de 2023. (Comunicación en póster)


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