Trabajo Fin de Grado defendido por Lucía Aroca Lara

18 de septiembre de 2019

Bornavirus (BDV) es el agente causal de la enfermedad de Borna (BD) que, clásicamente, se describe como una meningoencefalomielitis no supurativa, de curso crónico y progresivo, que afecta principalmente a caballos y ovejas causando alteraciones neurológicas y del comportamiento. Actualmente hay controversia acerca del posible aspecto zoonósico de BD.

El diagnóstico de BD es difícil, ya que existen numerosos diagnósticos diferenciales de patógenos con signos clínicos similares en équidos, por lo que el diagnóstico clínico por sí solo es insuficiente para diagnosticar la enfermedad. Hasta ahora ningún método de diagnóstico es lo suficientemente sensible y específico para usarse de forma exclusiva ante una sospecha clínica de BD.

El objetivo de este trabajo fue la puesta a punto y validación de una reacción en cadena de la polimerasa para ARN (RT-PCR) múltiple a tiempo real para la detección simultánea de dos secuencias correspondientes a la nucleoproteína N (p40) y fosfoproteína P (p24) de Orthobornavirus tipo 1 de mamífero (BDV-1), con las mismas sondas y cebadores utilizados en un estudio publicado en 2007 por Schindler et al. Además, se realizó un cribado para detectar la posible infección por BDV-1 en 47 muestras de 20 caballos sanos (sangre periférica) y 20 caballos con signos neurológicos compatibles con BD (sangre periférica, líquido cefalorraquídeo e hisopos nasofaríngeos).

A pesar de que se obtuvo una buena eficiencia y especificidad en la RT-PCR a tiempo real, tan solo hubo amplificación de p24 a ciclos tardíos en 6 muestras de caballos (2 con signos neurológicos y 4 sanos), pero no de p40. Tras la electroforesis en gel de agarosa de los productos de amplificación en estas 6 muestras, no se observó ninguna banda compatible con la amplificación del fragmento de p24.

En conclusión, la RT-PCR a tiempo real desarrollada es eficiente y específica para la detección de BDV-1 en estas muestras, pero se deben seguir realizando ensayos para intentar obtener resultados similares en la amplificación de ambos genes (p40 y p24), comparando mediante PCR anidada convencional los resultados obtenidos en las muestras incluidas en este estudio y realizando un muestreo más amplio en caballos sanos y con signos neurológicos.