Comunicación oral en Reunión del Grupo de Microbiología Molecular de la SEM

6 de septiembre de 2016

Bernabe-Balas C., Santos-Lopez A., Ares M., Ortega-Huedo R., Montero N. y Gonzalez-Zorn B.

La transferencia horizontal de plásmidos entre distintas especies bacterianas supone un agravante del rápido aumento de la resistencia a antibióticos que existe actualmente. Sin embargo, no se conocen con claridad los mecanismos implicados en la adaptación y estabilización de un plásmido cuando es adquirido por un nuevo hospedador. Para explorar la capacidad adaptativa de los plásmidos transformamos el plásmido tipo ColE1 pB1000, adaptado a la familia Pasteurellaceae, en Escherichia coli DH5α, donde es altamente inestable, y lo evolucionamos con presión selectiva. Tras extraerlo y transformarlo de nuevo en E. coli, analizamos la estabilidad, el número de copias (NCP) y el nivel de resistencia (CMI) en el nuevo hospedador. La secuenciación de los plásmidos evolucionados reveló la adquisición de dos secuencias de inserción, IS1 e IS10, desde el cromosoma de E. coli a diferentes replicones. Ambas ISs se insertaron entre las relaxasas y el gen de resistencia, con tan solo dos nucleótidos de diferencia entre ellas. Así mismo, algunos plásmidos presentaron mutaciones puntuales en el origen de replicación (oriV). Sorprendentemente, la estabilidad de los plásmidos que portaban una IS o un SNP en el oriV se vio incrementada significativamente, siendo 100% estables cuando ambas modificaciones estaban en el mismo replicón. Mediante PCR cuantitativa comprobamos que un SNP producía un incremento del NCP en E. coli, sin embargo, el NCP se mantenía inalterado cuando pB1000 codificaba una IS. La CMI de las bacterias portadoras de plásmidos con un SNP también se vio significativamente aumentada, mostrando una relación con el aumento del número de plásmidos. Para investigar el mecanismo por el cual las ISs estabilizaban pB1000 clonamos dos fragmentos de ADN del mismo tamaño que las ISs en la misma posición de pB1000 donde éstas se insertaban. La estabilidad de estas construcciones fue muy similar a la de los plásmidos con una secuencia de inserción. Este resultado parece indicar que la interrupción de esa región plasmídica es clave para la estabilización de pB1000 en E. coli. Ésta es la primera descripción de la estabilización de un plásmido en un nuevo hospedador gracias a la adquisición de una secuencia de inserción, demostrando el importante papel que pueden tener los elementos móviles en la adaptación y diseminación de plásmidos en nuevos ambientes. Trabajo financiado por las Ayudas de Ministerio de Educación para la Formación de Profesorado Universitario (FPU). Referencia: FPU13/06215.

	Servicio de Zoonosis de Transmisión Alimentaria y Resistencia a Antimicrobianos (ZTA). Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET). Universidad Complutense (UCM).
	Departamento de Sanidad Animal. Facultad de Veterinaria. Universidad Complutense (UCM).

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