Andrea Ros Carrasco defendió este Trabajo Fin de Grado

24 de mayo de 2021

La tuberculosis animal es un problema en muchos países de la Unión Europea actualmente. Aunque la detección post-mortem de esta enfermedad se realiza principalmente mediante cultivo microbiológico, se busca el desarrollo de otros métodos para detectar a miembros del complejo Mycobacterium tuberculosis (MTBC). Una de las técnicas más desarrolladas y prometedoras para ello es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Este trabajo se centra en la optimización y validación de dos PCRs a tiempo real para la detección de M. caprae y M. bovis basadas en el gen lepA y en una deleción genómica en la región de diferencia 4 (RD4), respectivamente. Las PCRs se intentaron optimizar para alcanzar la máxima eficiencia pero solo fue posible hacerlo con la PCR para la detección de M. bovis. Se calculó el límite de detección, el rango dinámico y la especificidad y sensibilidad analítica frente a 13 especies bacterianas. Por último, se obtuvieron la especificidad y la sensibilidad diagnósticas analizando 52 muestras y comparándolo con el resultado del cultivo microbiológico.

El rango dinámico de la reacción abarcó desde 5,75 ng/reacción a 5,75 fg/reacción. La eficacia de la reacción fue del 96,4% con un R2 de 0,998. El límite de detección con un 95% de confianza fue de 1 equivalente genómico/reacción. Los valores de la sensibilidad y la especificidad diagnóstica frente a cultivo fueron de 93,75% (95% CI: 85,4% - 102,1%) y 100%, respectivamente. El valor predictivo positivo fue del 100% y el negativo de 90,9% (95% CI: 78,9% - 102,9%). La PCR a tiempo real para RD4 es comparable al diagnóstico por cultivo, con un coeficiente de 0,920, lo que hace que tenga un gran potencial para la detección de M. bovis en tejidos animales