Marta Valero Lorenzo defendió este Trabajo Fin de Grado

11 de octubre de 2018

Fundamento. La resistencia a colistina supone un grave problema de Salud Pública. La primera descripción de un gen plasmídico que codifica para resistencia a esta polimixina se realizó en 2015, habiéndose descrito hasta la fecha un total de ocho de estos genes. Generalmente, estos genes confieren resistencia mediante la modificación del lípido A, molécula diana de la colistina en la pared bacteriana, y, además, al estar codificados en plásmidos, pueden estar implicados en una transmisión horizontal de la resistencia. La reciente clasificación de la colistina por parte de la OMS como un “antibiótico críticamente importante para la medicina humana”, así como la descripción cada vez más frecuente de resistencias, dejan patente la necesidad de desarrollar y validar técnicas de detección eficaces.

Los objetivos de este trabajo serán, por tanto, la validación del medio selectivo y diferencial CHROMID® Colistina R agar (BioMérieux, Marcy-L’Etoile, Francia), recientemente comercializado, así como la determinación de la utilidad de técnicas moleculares (reacción en cadena de la polimerasa, PCR, y PCR a tiempo real) y la comparación entre ambos tipos de métodos de detección de resistencias.

Metodología. A partir de muestras de heces de origen porcino de los años 2012, 2013 y 2015, se ha llevado a cabo el cultivo en el medio mencionado siguiendo el protocolo indicado en la ficha técnica del mismo con ligeras modificaciones, aplicándose técnicas de identificación bacteriana a las colonias cultivadas (MALDI-TOF, tiras API 20E). Además, se ha realizado la qPCR para la detección del gen mcr-1, previa realización y optimización de una curva de estándares, y la PCR convencional para la detección de múltiples genes de resistencia (mcr-1 – mcr-4).

Conclusiones. Los resultados demuestran una excelente correlación (del 100% de los casos, IC95: 88,88-100) entre la aparición de colonias de color rosa en el medio de cultivo y la presencia de Escherichia coli, además de la posibilidad de cultivar múltiples bacterias que no constan en las indicaciones del medio. En cuanto a la qPCR, se ha obtenido un resultado positivo en 20/20 y 19/20 muestras en los años 2012 y 2015, lo cual deja patente la gran sensibilidad de la técnica. La sensibilidad de la PCR convencional es algo menor dada la muestra empleada (aislados a partir del medio de cultivo). El gen mcr-1 se ha encontrado en mayor proporción, debiendo destacar también la presencia de mcr-4, siempre en aislados identificados como Citrobacter freundii.